液相色譜法測(cè)定決明子中蒽醌類成分的含量

【摘要】 　　目的測(cè)定決明子中5種蒽醌類成分的含量。方法采用液相色譜法。色譜柱：Shim-pack CLC-ODS C18柱；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫；流速：1 ml/min；λ：440 nm。結(jié)果該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好。結(jié)論 該方法可以測(cè)定決明子中5種蒽醌類成分的含量。

　　【關(guān)鍵詞】  液相色譜法 決明子 蒽醌

　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae. MethodsHPLC method was developed .The separation was performed on an ODS column with the phase of CH3OH-0.1% phosphoric acid. The flow rate was 1ml/min and the detection wavelength was 440 nm. ResultsThis method was convenient and reliable. ConclusionThis method can be used to determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae.

　　Key words：HPLC;  Semen Cassiae;  Anthraquinones

　　決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥成熟種子。性味甘、苦、咸、微寒，歸肝、大腸經(jīng)。具有清肝明目、潤(rùn)腸通便之功效，為臨床常用中藥［1］。其主要化學(xué)成分為蒽醌類化合物。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定了決明子中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，為決明子中有效物質(zhì)研究奠定了基礎(chǔ)。

　　1  儀器與材料

　　LC-l0ATvp液相色譜儀（日本島津公司），AEG-45SM電子天平（十萬(wàn)分之一），大黃素（批號(hào)0756200009）,大黃酚（批號(hào)110796200513）,大黃素甲醚（批號(hào)07589803）（均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所），決明子（重慶合川GAP種植基地，由重慶市中藥研究院生藥室提供并鑒定），水為重蒸水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

　　2  方法與結(jié)果

　　2.1  對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取蘆薈大黃素0.53 mg,大黃酸0.58 mg,大黃素0.55 mg,大黃酚0.53 mg,大黃素甲醚0.58 mg，加甲醇超聲溶解,分別定容至5 ml,作為對(duì)照品溶液。

　　精密吸取上述5種對(duì)照品溶液各2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得混合對(duì)照品溶液，其濃度分別為蘆薈大黃素0.021 2 mg/ml，大黃酸0.023 2 mg/ml，大黃素0.022 mg/ml，大黃酚0.021 2 mg/ml，大黃素甲醚0.023 2 mg/ml。

　　2.2  供試品溶液的制備取決明子藥材粉末（過(guò)4號(hào)篩）約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加80%乙醇100 ml回流提取至無(wú)色，合并提取液，定容至100 ml，精密吸取25 ml提取液，經(jīng)減壓回收后，殘?jiān)訚舛葹? mol/L鹽酸溶液40 ml回流水解3 h，然后用120 ml氯仿分4次回流萃取，30 ml/次，合并氯仿萃取液并加適量蒸餾水洗至中性，回收氯仿。殘?jiān)状挤氯芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得［2，3］。

　　2.3  色譜條件色譜柱為Shim-pack CLC-ODS C18（6.0 mm ×150 mm,5 um）；流動(dòng)相為甲醇－0.1%磷酸水溶液梯度洗脫；流速1 ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)440 nm.

　　2.4  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取混合對(duì)照品溶液8 ，10，12 ，14 ，16 μl進(jìn)樣，測(cè)定基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積 ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算混合對(duì)照品中各對(duì)照品的回歸方程及線性范圍，結(jié)果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的回歸方程分別為：Y = 814521X -20 442，Y = 1 110 506X - 7 296，Y=1431 202X + 4 274，Y =1 739 861X - 24 381，Y = 707 106X - 26 453，其線性范圍分別為：0.170～0.339，0.186～0.371，0.176～0.352，0.170～0.339，0.186～0.371  μg。

　　2.5   精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μl，進(jìn)樣，測(cè)定各峰峰面積，連續(xù)測(cè)定5次，求得各峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為：蘆薈大黃素0.7%，大黃酸1.8%，大黃素0.6%，大黃酚1.1%，大黃素甲醚1.4%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

　　2.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

　　2.6.1  對(duì)照品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μl，進(jìn)樣，分別于0，2，4，8，12，24 h后重復(fù)進(jìn)樣 ，計(jì)算各成分峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為：蘆薈大黃素0.9%，大黃酸0.8%，大黃素0.7%，大黃酚1.2%，大黃素甲醚1.3%。結(jié)果表明混合對(duì)照品溶液在24 h 內(nèi)基本上是穩(wěn)定的。

　　2.6.2  供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10 μl，進(jìn)樣，分別于0，2，4，8，12，24 h后重復(fù)上述操作 ，計(jì)算各成分峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為：蘆薈大黃素0.6%，大黃酸0.7%，大黃素1.3%，大黃酚0.6%，大黃素甲醚1.7%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本上是穩(wěn)定的。

　　2.7  重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)  精密稱取決明子藥材5份，照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試液，精密吸取供試品溶液10 μl，進(jìn)樣，測(cè)定各成分峰面積值，計(jì)算各成分平均含量及RSD值分別為：蘆薈大黃素為0.0084%，RSD為0.8%；大黃酸為0.0079%，RSD為1.1%；大黃素為0.0313％，RSD為1.2%；大黃酚為0.1732%，RSD為0.7%；大黃素甲醚為0.0883%，RSD為1.3%。結(jié)果表明，該方法具有較好的重現(xiàn)性。

　　2.8  加樣回收率實(shí)驗(yàn)  精密稱取決明子藥材6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別精密加入大黃酚對(duì)照品（50 μg/ml）15  ml。照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試液，精密吸取供試品溶液10 μl，進(jìn)樣，測(cè)定大黃酚的峰面積。結(jié)果見(jiàn)表1。

　　表1  大黃酚回收率測(cè)定結(jié)果（略）

　　表1表明，大黃酚的平均回收率為100.94%，RSD值為2.12% 。表明該測(cè)定方法是合理可行的。

　　2.9  樣品的含量測(cè)定取不同批次決明子藥材粉末（過(guò)4號(hào)篩）各約1 g，精密稱定。照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試液，精密吸取各供試品溶液10 μl，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，混合對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1～2。測(cè)定對(duì)照成分峰面積，計(jì)算含量，即得。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

　　圖1  決明子混合對(duì)照品色譜圖（略）

　　圖2  決明子藥材色譜圖（略）

　　表2  樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）

　　3  結(jié)論

　　結(jié)果測(cè)得，決明子藥材中含蘆薈大黃素平均為0.0081%，大黃酸平均為0.007 9%，大黃素平均為0.030 6%，大黃酚平均為0.176 0%，大黃素甲醚平均為0.088 3%。

　　本文采用液相色譜法同時(shí)測(cè)定決明子藥材中5種蒽醌類成分的含量，方法簡(jiǎn)便，分離度好，結(jié)果可靠，可用于控制決明子藥材的質(zhì)量。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典,Ⅰ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:98.

　　［2］ 楊黎燕.楊秉勤,郎惠云.決明子蒽醌提取方法的研究［J］.西部糧油科技,2003,28（2）：59.

　　［3］ 蔣午峻，王 巧，袁志芳,等. 液相色譜法同時(shí)測(cè)定決明子中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚［J］.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,27（4）：271.